Production d'un anticorps polyclonal pour la détection du virus de la jaunisse nanisante de l'orge ou Barley yellow dwarf virus (BYDV) en Tunisie

Asma Najar, Safaa Kumari, Khaled Makkouk. (1/5/2016). Production d'un anticorps polyclonal pour la détection du virus de la jaunisse nanisante de l'orge ou Barley yellow dwarf virus (BYDV) en Tunisie. Journal of new sciences, Agriculture and Biotechnology, 29 (6), pp. 1687-1696.

Abstract

Le virus de la jaunisse nanisante de l'orge ou Barley yellow dwarf virus (BYDV) est connu comme étant le virus le plus important sur céréales. En Tunisie, les contaminations peuvent dépasser les 40% sur orge et avoine dans certaines régions. Les techniques sérologiques sont des techniques de diagnostic de masses, rapides et de grande sensibilité qui ont été développées pour l’identification des infections virales lorsqu’on dispose d’anticorps adéquatement préparés. Elles sont d’une grande importance lors de prospections de grande envergure, dans les études épidémiologiques et également dans les essais de criblage pour la sélection de génotypes résistants. Or, la disponibilité des anticorps et leur coût peuvent constituer un obstacle à la réalisation des analyses envisagées. Dans ce contexte, l'objectif de notre étuve vise la production d'un anticorps polyclonal anti-BYDV dont la qualité et la spécificité ont été vérifiées. En effet, La purification virale réalisée a donné d’une part un ratio (UV 260/280) égal à 1,49 et d’autre part une quantité de virus présent dans les feuilles d’orge aux environs de 0,6 mg/kg de matière fraîche. Une telle concentration est jugée satisfaisante par rapport à des valeurs de référence. L’antisérum produit suite à cinq injections intramusculaires espacées d’une semaine à un lapin new zélandais et analysé après une série de dilutions, montre une réaction positive par TBIA ainsi qu’une densité optique élevées par ELISA-DASI même à des dilutions élevées pouvant aller respectivement jusqu’à 1/1024000 et 1/16000. Par ailleurs, une dilution jusqu'à 40 fois de l’antigène n’engendre pas une diminution de la sensibilité des anticorps utilisés suite au test ELISA -DASI alors que par Dot Blot, la réaction colorimétrique, demeure visible par rapport à celle du témoin négatif n’ayant montré aucune coloration , et ce jusqu'à une dilution au 1/160 de l’antigène. Cet anticorps anti-BYDV-PAV dont la qualité et la spécificité ont été vérifiées est actuellement utilisé avec un succès comparable à celui obtenu avec des anticorps étrangers ayant servi dans nos essais antérieurs.